ACKNOWLEDGMENTS … … … … … … … … … … . . Xl II INTRODUCTION … … … … … … … … … … … … . I STERILITY … … … … … … … … … … … … … … . 5 Aseptic Technique … … … … … … … … … … … … … . . 5 Physical manipulations * Use of the sterile cabinet (hood) Sterilization Methods … … … … … … … … … … … … . 14 Heat * Radiation * Toxic gas * Filtration * Antibiotics Quality Control of Sterilization … … … … … … … … … . . 23 Routine labeling Suggested Readings … … … … … … … … … … … … … 25 Exercises … … … … … … … … … … … … … … … . . 26 vi CONTENTS ROUTINE CELL CULTURE … … … … … … … … … . 29 Feeding Schedules and Media Components … … … … … … . . 29 General properties of media and salt solutions * water as a reagent* Establishingfeeding schedules Subcultivation … … … … … … … … … … … … … … . 46 Solutions and methods for adherent cells * Common enzyme solutions * Inoculating (seeding) the cultures Cell Enumeration and Cell Viability … … … … … … … … . . 54 Hemocytometer * Particle counter * Cell viability Putting Routine Methods to Work … … … … … … … … … 63 Normal cell growth characteristics Detecting and Disposing of Contamination … … … … … … . . 66 Bacteria and fUngi * Fungi * Mycoplasma * Viruses * Dealing with contamination Troubleshooting … … … … … … … … … … … … … . . 73 Inadequate cell growth * Recurrent contamination * When to call your vendor Safety … … … … … … … … … … … … … … … … . 80 Biological hazards * Chemical hazards Suggested Readings … … … … … … … … … … … … … 85 Problem Set … … … … … … … … … … … … … … . . 85 Exercises … … … … … … … … … … … … … … … . . 89 EXPERIMENTS IN CULTURE … … … … … … … … . . 91 II Alterations of the Media … … … … … … … … … … … . . 91 Serum * Treatments of serum * Plasma-derived serum * Serum-free and low-protein media Substrata… … … … … … … … … … … … … … … . 101 Coatingplasticware with solutions * Alterations with polymers * Using cells to coat the plasticware * Culturing cells on microcarriers Altering the Environment… … … … … … … … … … … 106 Temperature changes * Gaseous changes Problem Set … … … … … … … … … … … … … … . 110 Exercises … … … … … … … … … … … … … … … . 110 CONTENTS vii PRIMARY CELL CULTURE… … … … … … … … … . 113 Isolation … … … … … … … … … … … … … … … . 114 Dissection * Enzymatic dissociation methods * Nonenzymatic isolation * Purification of cell suspensions * Consideringyield and survival Chatacterization … … … … … … … … … … … … … .